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间充质干细胞:脐带间充质干细胞分离怎么实现?

2021-09-28

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脐带间充质干细胞(UCMSC)分离是指通过机械、酶消化或组织培养获得单细胞悬浮液,然后通过脐带间充质培养基获得间充质干细胞的过程。由于间充质干细胞具有壁生长的特点,特别是在塑料培养瓶中,可以使用简单的塑料培养瓶去除大部分杂质细胞,获得相对较高的纯度UCMSC。

采集的新鲜脐带组织用生理盐水或平衡液清洗,必要时用含有青霉素/链霉素的生理盐水或平衡液(双抗)浸泡5~10分钟,以最大限度地降低污染风险,然后用组织均匀浆或眼科切割或在液氮中研磨组织(切割前通常机械剥离脐带外膜和血管),然后进行原始分离培养。

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原代分离常用的方法有微组织块壁培养法、脐带匀浆胶原酶消化法、改良胶原酶消化法等。

为了去除杂质,100目滤网通常用于分离培养,然后通过均匀浆或酶消化细胞悬液。间充质干细胞的纯化主要采用贴壁传代培养、差速贴壁、流式细胞分离、免疫磁珠分离等方法,可获得纯度大于99%的相对均匀的间充质干细胞。

为获得合格UCMSC,合格的细胞制备用品(如无菌培养液、无毒细胞培养瓶等)必须在合格的操作环境下使用(如细胞工程实验室100级操作台),具有细胞制备技术操作技能的工作人员应严格按照《细胞分离扩增操作规范》执行。因此,分离扩增UCMSC质量标准和技术规范必须从源头上建立。


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